Journal:生物工程学报
Place of Publication:中国科学院微生物研究所;中国微生物学会
Key Words:细胞穿膜肽，细胞珠蛋白，融合蛋白，纯化，氧化应激
Abstract:旨在利用细胞穿膜肽TAT 的穿膜作用和细胞珠蛋白 (Cytoglobin, Cygb) 的抗衰老、抗纤维化的功能，将二者通过基因工程的手段融合在一起，以期获得能够穿透细胞屏障的Cygb。通过两次重叠PCR 技术获得了TAT-Cygb DNA，将其插入原核表达载体pET22b 质粒中，转化至大肠杆菌BL-21, 筛选出可表达TAT-Cygb 融合蛋白的大肠杆菌工程菌株。经乳糖诱导表达TAT-Cygb，CM 阳离子交换层析 (CM Sepharose Fast Flow Protocol) 获得纯度高达95%的TAT-Cygb 融合蛋白，分子量约23 kDa。生物活性实验显示，TAT-Cygb 过氧化物酶比活力达到(422.30±0.36) U/mg。TAT-Cygb 预处理的Hacat 细胞可免受H2O2氧化应激的损伤 (RGR=100%)，同时TAT-Cygb 可治疗已被H2O2 氧化损伤的细胞 (RGR=98%)，与Cygb 处理组相比具有显著差异 (RGR=79%)。该研究首次成功利用大肠杆菌表达系统表达了可穿透细胞膜的、有生物活性的TAT-Cygb 融合蛋白，为继续开展Cygb 在抗衰老、抗纤维化和抗癌领域的研究奠定了基础。
Translation or Not:no
Date of Publication:2013-12-08
First Author:XRA,施伟杰(学),LZF,张如婧(学)